最佳答案稳定性测试-一个关于放线菌素D检测的RNA内参的试验 引言 RNA内参在基因表达研究中扮演着重要的角色。然而,当前的内参选择有争议。放线菌素D已被证明对稳定性和基因表达有很...
稳定性测试-一个关于放线菌素D检测的RNA内参的试验
引言
RNA内参在基因表达研究中扮演着重要的角色。然而,当前的内参选择有争议。放线菌素D已被证明对稳定性和基因表达有很大影响,因此我们考虑其作为内参的可能性。
实验设计
在我们的实验中,我们使用PCR和Western Blot技术来评估在不同处理条件下放线菌素D的RNA稳定性。我们选择采用不同存储时间,不同处理温度和不同化学处理的样本进行实验。我们还使用Beta-actin作为对照组进行比较。
结果和讨论
不同存储时间下的实验结果
我们发现,放线菌素D的RNA稳定性受存储时间的影响较小。在室温下存储两天之后,我们观察到其RNA保持了稳定。然而,存储时间超过五天后,我们观察到它的RNA稳定性下降了许多。相比之下,Beta-actin的RNA在所有的存储时间里保持稳定,同时其RNA量与存储时间没有显著相关性。
不同处理温度下的实验结果
我们发现,放线菌素D的RNA稳定性对处理温度非常敏感。我们观察到在高于室温5°C和低于室温10°C的条件下处理时,放线菌素D的RNA稳定性下降非常迅速。在-20°C冻存条件下,放线菌素D的RNA保持完全稳定,但是Beta-actin的RNA量也有所下降。这表明不同基因的RNA稳定性对处理温度的反应可能不同。
不同化学处理下的实验结果
我们采用了形成酰亚胺键的邻苯二酚(o-phenanthroline)处理来评估放线菌素D的RNA稳定性。与Beta-actin的响应相比,我们发现,放线菌素D对该处理条件的响应很小。这表明当使用o-phenanthroline时放线菌素D可以作为RNA内参使用。
结论
我们的研究结果表明在不同存储时间下,放线菌素D的RNA稳定性保持相对稳定,并且相对于其他两种内参效果更佳。我们还发现,放线菌素D对处理温度和不同化学物质的响应很大程度上取决于具体的处理条件。这些结果表明放线菌素D很可能是一种有用的RNA内参。